急性早幼粒细胞白血病治疗


作者:yatao 日期:2010年07月15日 来源:互联网 浏览:
急性早幼粒细胞白血病治疗  
     急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)是临床上第一个应用诱导分化治疗取得成功和第一种针对肿瘤特异性标志分子进行治疗的人类恶性肿瘤。95%以上APL患者具有特征性的非随机染色体t。该易位使15号染色体上的早幼粒细胞白血病(PML)基因与17号染色体上的维甲酸受体α(RARα)基因发生融合,表达PML-RARα融合蛋白。少数变异型APL患者产生该易位使11号染色体上的早幼粒细胞白血病锌指(PLZF)基因与17号染色体上同样的RARα基因发生融合,表达为PLZF-RARα融合蛋白。
研究表明,PML-RARα或PLZF-RARα融合蛋白可显性失活(dominant negative)野生型PML或PLZF蛋白的功能和干扰正常RARα信号传导,因而研究融合蛋白如何影响PML蛋白正常功能及RARα信号传递成为理解APL发病及诱导分化机制的关键。 
  1 PML蛋白的正常功能及融合蛋白对PML蛋白功能的影响 早期体外转染实验表明,PML具有增殖抑制活性。Wang等以敲除(knockout)PML基因小鼠作为体内研究模型,发现纯合缺失PML鼠(缺失两个PML基因)有如下特征:①外周血成熟粒细胞(中性、嗜酸、嗜碱、单核)显著低于正常鼠;骨髓、肝、脾、淋巴结成熟粒细胞显著减少;②小鼠胚胎成纤维细胞(mouse embyonic fibroblast, MEF)增殖率和3H-TdR掺入率显著高于正常鼠,而杂合缺失(仅缺失一个PML基因)PML鼠居中;③MEF克隆形成能力增强,S期细胞显著增多,G0或G1期细胞显著减少;④在诱变剂DMBA和TPA作用下,纯合缺失PML鼠皮肤发生更多的乳头状瘤。研究表明,PML蛋白抑制增殖的机制是通过阻滞细胞周期实现的。将PML基因转染乳腺癌细胞,Le等发现cyclin D1、CDK2表达显著下调,P53、P21WAF1/CIP1表达上升,Rb蛋白去磷酸化,导致细胞阻滞在G1期。Wang等进一步发现维甲酸(RA)信号通路可能需要PML蛋白的增殖抑制活性。在甲基纤维素培养体系中,正常鼠的造血前体细胞形成红系、髓系集落的数量在加入RA后明显增加,但纯合缺失PML鼠则无此效应。同时,作者发现1 μmol/L RA可诱导正常MEF细胞表达P21WAF1/CIP1,而缺失PML的MEF细胞则无,说明PML介导RA依赖的P21WAF1/CIP1表达。由于P21WAF1/CIP1能诱导造血细胞分化,因而PML的功能缺失可解释APL情况下的分化阻滞。上述结果表明,PML蛋白至少部分地参与RARα/RXR信号传递。 
  PML蛋白的功能发挥与它在细胞内的定位密切相关。在正常细胞,PML蛋白以不连续点状方式(speckled pattern,punctate pattern)分布在细胞核内,电镜下呈0.3~0.5 μm直径,且与核基质相关的致密圈饼样结构结合称为核体(Nuclear bodies, NB)或POD(PML Oncogenic Domain)结构,正常细胞核约含10~30个。POD结构实质上为多蛋白复合体,除PML蛋白外,尚含SUMO-1、pRb、SP100、rfp、NDP55、ISG-20等蛋白成分。其中一些是自身免疫性疾病如原发性胆汁性肝硬化患者的核抗原。应用酵母双杂交系统,最近发现POD结构的另一个新成员是SUMO-1(Small 1 Ubiquitin-Mediated Protein)。SUMO-1属泛素相关蛋白Sentrin家族成员。实验证明SUMO-1参与PML基因的翻译后修饰过程,并因此介导PML蛋白的细胞内定位,主要依据有:①在表达PML蛋白的Hela细胞和COS细胞,免疫沉淀试验发现SUMO-1与PML蛋白形成共价复合物,该结合是可逆的,且依赖磷酸化发生;②采用免疫荧光双标记发现几乎所有POD结构内均含有SUMO-1蛋白和PML蛋白;③在非APL细胞,未经SUMO-1修饰的PML蛋白弥散分布于核基质中,而被SUMO-1修饰的则定位于POD结构。用As2O3处理PML细胞4小时后弥散性荧光完全消失,代之以POD结构增多、扩大,提示As2O3能使弥散性分布的SUMO-1和PML共定位于POD结构中。NB4细胞(含PML-RARα)经RA和As2O3各处理24小时、2小时后,Western blotting显示PML-RARα融合蛋白完全降解。

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